双荧光素酶报告实验（Dual-LUC）

技术简介双荧光素酶报告实验Dual-luciferase reporter assayDLR是一种在生物学研究中广泛应用的技术主要用于解析基因表达调控机制可定量评估转录因子与靶基因启动子的相互作用及启动子活性。技术原理该实验通常使用萤火虫荧光素酶Firefly Luciferase和海肾荧光素酶Renilla Luciferase双报告系统萤火虫荧光素酶基因常作为报告基因与目标基因的启动子序列构建在同一载体上其表达直接受目标启动子调控。海肾荧光素酶基因作为内参基因由组成型启动子驱动在细胞内稳定表达。当细胞同时转染含有这两种基因的载体后加入相应的荧光素底物两种荧光素酶会催化底物发光。通过检测两种荧光信号的强度比值Luc/Ren可归一化处理实验数据消除细胞转染效率、细胞活性等因素对实验结果的影响从而准确反映目标启动子的活性。适用场景转录因子与调控序列的互作验证miRNA与靶mRNA的互作验证miRNA与IncRNA的靶向互作验证转录因子调控活性分析启动子活性检测启动子结构功能分析启动子单核苷酸多态性(SNP)分析技术流程结果示例